在
ELISA試劑盒的操作過(guò)程中，我們除了需要多點(diǎn)細(xì)心之外，還有一些需要重點(diǎn)注意的地方，下面我們來(lái)仔細(xì)說(shuō)說(shuō)。
方面一：檢驗(yàn)技師
應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力，對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。
方面二
使用校對(duì)過(guò)的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。
方面三：仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)
嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行規(guī)范化操作。ELISA試劑盒不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方，反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn)。
方面四：洗滌*
洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。
方面五：嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間
反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，酶失活；反應(yīng)時(shí)間過(guò)短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
方面六
注意ELISA試劑盒保存期，過(guò)保存期的試劑不能使用。
方面七：評(píng)估試劑的實(shí)用性
試劑的穩(wěn)定與否，對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn)，判定試劑符合要求后方可使用。
方面八：嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間
顯色時(shí)間過(guò)短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過(guò)少，易出現(xiàn)假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色，應(yīng)判為假陽(yáng)性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報(bào)陽(yáng)性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
方面九：加樣要準(zhǔn)確、快速
如果加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，ELISA試劑盒直接影響顯色結(jié)果。顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn)，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外，尤其室溫過(guò)高時(shí)，保存期會(huì)縮短甚至失效。
